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  • Firefly & Renilla Dual Luciferase Assay Kit(双荧光素酶报告基因检测试剂盒)

    产品货号: F6075

    产品规格: 20T/100T/1000T

    目录价(元):388/1500/8400

    可替代市场同类产品

    大包装询价


产品概述:

产品内容

组分

20 T

100 T

1000 T

  A.5× Passive Luciferase Lysis Buffer

2 mL

10 mL

100 mL

  B.Firefly Luciferase Assay Buffer

2 mL

10 mL

100 mL

  C.D-Luciferin

0.4 mg

2 mg

20 mg

  D.Renilla Luciferase Assay Buffer

2 mL

10 mL

100 mL

  E.50× Coelenterazine

40 ?L

200 ?L

2 mL


储存条件

-80℃保存。将 C 组分溶解到 B 组分后,该混合液不可反复冻融,建议进行小批量分装。Renilla Luciferase Assay solution(D + E)应新鲜配制,当天使用。有效期见外包装

产品先容
Firefly & Renilla Dual Luciferase Assay Kit(双荧光素酶报告基因检测试剂盒)为双报告基因检测提供有效的手段。在 DLR检测中,萤火虫(Firefly)荧光素酶和海肾(Renilla)光素酶的活性可在单个样品中依次检测。首先是先以光素(luciferin)为底物来检测萤火虫光素酶(Firefly luciferase),后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾光素酶(Renilla luciferase),并且在后续加入海肾光素酶底物时,同时加入抑制萤火虫荧光素酶催化luciferin发光的物质,使后续检测仅仅检测到海肾光素酶的活性,实现双光素酶报告基因检测。通过光素酶和其底物这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5启动子区克隆在luciferase的上游,或把3-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定光素酶活性。通过光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。 Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参,以消除细胞数量和转染效率的差异。
萤火虫光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物光(bioluminescence)。海肾光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白,在氧气存在的条件下,可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide,在coelenterazine氧化的过程中也会发出生物光。生物光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。该试剂盒具有检测迅速、灵敏度高、检测范围广,无细胞内源活性干扰等特点。

注意事项
1. 为取得最佳测定效果,在用单管的化学发光仪测定时,样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制一致;使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时,宜先把样品全部加好,然后统一加入萤火虫光素酶检测试剂。
2. 由于温度对酶反应有影响,所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

说明书:


  宇恒-F6075

常见问题解答:


双萤光素酶报告基因最适反应温度?
室温(20-22℃)。反应时各个组分(细胞裂解产物,底物工作液等)都需要调整到室温。此两种萤光素酶的反应速率是受温度影响的,为了保证实验的一致性,大家推荐此两种工作液在检测时都孵育至室温。

双萤光素酶报告基因载体该如何选择?
1.萤火虫萤光素酶建议选取pGL-3或pGL-4或者自己构建的载体;
2.海肾萤光素酶建议选取phRL-TK或pGL-4载体或者自己构建相应的载体。建议海肾载体不使用强启动子(如SV40、CMV),而选用中等强度的启动子(如TK)。

检测的萤光数值很低怎么办?
检测的萤光数值很低说明细胞裂解液中的萤光素酶含量很低。通常解决办法为:
1.转染的质粒采用细胞转染级别的质粒抽提试剂盒抽提。
2.优化转染条件,尽可能的提高转染效率。
3.增加实验的细胞量,并且裂解细胞时,适当减少细胞裂解液的量。

进行检测的过程中,萤光信号值太高该如何进行调整?
1.在转染实验后,减少细胞的孵育时间。
2.降低萤光信号采集时间。
3.进行样品的稀释。

引用及参考文献:


引用文献
1.DDX3 Activates CBC-eIF3-Mediated Translation of uORF-Containing Oncogenic mRNAs to Promote Metastasis in HNSCC.
应用方向:基因转录调控检测

2.Glucose starvation induces LKB1-AMPK-mediated MMP-9 expression in cancer cells.
应用方向:基因转录调控检测

3.Repression of MAP3K1 expression and JNK activity by canonical Wnt signaling.
应用方向:基因转录调控检测

4.The cellular stress proteins CHCHD10 and MNRR1 (CHCHD2): Partners in mitochondrial and nuclear function and dysfunction.
应用方向:基因转录调控检测

5.Large-Scale Screening of Natural Products Transactivating Peroxisome Proliferator-Activated Receptor α Identifies 9S-Hydroxy-10E,12Z,15Z-Octadecatrienoic Acid and Cymarin as Potential Compounds Capable of Increasing Apolipoprotein A-I Transcription in Human Liver Cells.
应用方向:基因转录调控检测
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