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  • LipoGene? 2000 Star Transfection Reagent(低毒款)

    产品货号: L7002

    产品规格: 50 μL/0.75 mL/1.5 mL

    目录价(元):158/1600/3000

    可替代的同类产品:Lipofectamine 2000,Fugene HD等转染试剂

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产品概述:

储存条件
4℃保存,有效期见外包装(避免冷冻)。

产品先容
LipoGene TM 2000 Star Transfection Reagent 是一种非常高效的新型转染试剂,细胞毒性更低,转染效果更佳,达到了国际最主流转染试剂的转染效果。适用于把质粒、siRNA 或其它形式的核酸包括 DNA、RNA、寡核苷酸转染到真核细胞中。
LipoGene TM 2000 Star Transfection Reagent 对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明显的细胞毒性,并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。
LipoGene TM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂的使用方法和常用的 Lipofectamine?2000 Reagent 完全一致,转染效率比 Lipofectamine? 2000 Reagent 更高。
LipoGene TM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂不仅适用于质粒、siRNA 等单一成分的细胞转染,也适合多个质粒或者质粒与 siRNA 等的组合转染。
LipoGene TM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂转染过表达质粒后,通常 24-48 h 后达到较高的蛋白表达水平,并且很多情况下蛋白表达量在转染后 48 h 显著高于转染后24 h;转染 siRNA 通常 3-5 天后对于目的基因的下调水平会比较理想。
LipoGene TM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂转染细胞时,基本不受细胞培养液中血清影响,即可以在血清存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果,推荐转染时使用不含抗生素培养液。转染后不必去除转染液,或者改变或添加培养基,但转染 4-6 h 后可去除转染液。

注意事项
1. 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。
2. 转染前细胞必须处于良好的生长状态。
3. 需自备不含抗生素的无血清培养液或 Opti-MEM?培养液或普通的 DMEM 培养液。
4. LipoGene TM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂不能vortex 或离心,宜缓慢晃动混匀。
5. LipoGene TM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂使用后请马上盖好盖子,避免长时间暴露在空气中,影响转染效率。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:


   宇恒-L7002

常见问题解答:


转染效率问题
不同细胞转染效率有所差别经过测试,大家转染效果较好的有:293、293FT、Hela、HO1980、A549、MEF、TS细胞、HCT116、CHO等

◆细胞密度和传代数是否是转染的重要考虑因素?
是的,细胞密度是影响转染效率的重要参数。如果密度太低,转染试剂对细胞的毒性会比较大。如果细胞密度高,可能会观察到低于预期的转染效率。细胞密度在60%至80%时具有出色的转染效率。传代次数可能会影响转染实验,过多的传代次数可能会降低转染性能。大家建议细胞分裂不超过30代。如果转染性能下降,并且细胞已长期培养或过度/不正确传代,大家建议您重新复苏细胞。

◆转染期间可以在培养基中使用抗生素吗?
抗生素可以用于培养细胞系的培养基中。 但是,大家不建议在转染培养基中使用抗生素,除非事先在转染的细胞类型中进行过测试。因为抗生素会影响转染效率。

◆如何选择
L7002L7003
L7002低毒款L7003高效款。如果您的细胞对毒性比较敏感,建议选择L7002,如果您的细胞对毒性不敏感,比如一些癌细胞,建议选择L7003.

◆转染试剂的稳定性如何?
大家的转染试剂是在4℃条件下储存的。如果贮存和使用得当,除了管子标签或者产品COA文件中有特别标注外,大家保证从收到产品之日起一年内产品的性能正常。大家不推荐冻存转染试剂,因为冻存会降低转染效果。

◆反向转染与正向转染之间区别是什么?该如何选择?
在正向转染过程中,细胞铺于培养孔之中,用通常的方式制备转染复合物并在第二天将其加入细胞培养物中。在反向转染过程中,在培养孔之中制备转染复合物,之后再加入细胞与培养基。反向转染比正向转染过程更迅速,因此是高通量转染的理想之选。在非高通量的转染操作中,通常正向转染对于大多数类型的细胞转染效果更佳。

◆我可以用该试剂来共转染质粒吗?
可以。标准转染实验方案需要保持转染混合物中DNA的总量恒定。也就是说,如果您的试验方案需要1 mg的质粒,则两种共转染质粒各使用0.5 mg,或是4种共转染质粒各使用0.25 mg。当利用共转染对不同的质粒引入选择性标记时,大家建议使用摩尔比3:110:1,目标质粒比选择质粒过量,以确保目标质粒和选择质粒同时存在。

◆为什么我的转染实验不具有可重复性?
一般情况下,无论如何尝试控制转染影响因素,两次转染的效率仍会表现出一定程度的差异性。转染时,请保持所有转染影响因素,如细胞铺板密度、传代次数和生长期一致。尽可能解冻新的细胞。为了尽量减少转染差异的影响,可以使用内参,如β半乳糖苷酶或萤光素酶。可以共转染表达质粒和参考质粒,分析β-gal或荧光素酶的活性。

◆为获得最佳转染效果,转染时应注意什么?
1.  转染时的细胞密度应处于60%80%的汇合度。细胞应处于对数生长中期。为了确保在实验组间获得最为稳定的结果,建议您最好能够在实验开始时优化细胞铺板密度。
2. 优化阳离子脂质试剂和DNA的用量。除细胞状态以外最重要的因素是脂质体:DNA的比率。
3. 在配制用于DNA-阳离子脂质体复合物形成的培养基中不要使用抗生素、EDTA、柠檬酸盐、磷酸盐、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白聚糖。
4. 不要使用冰冻过的,或在温度低于4°C的冰箱隔间中储存的阳离子脂质试剂。
5. 请确保转染DNA中的启动子-增强子能够兼容靶标细胞类型。


引用及参考文献:


1.Spotted knifejaw (Oplegnathus punctatus) MyD88: Intracellular localization, signal transduction function and immune responses to bacterial infection
Xiaobing Liu,X宇恒mei Li,Xinxin Du,Minmin Sun,Xuangang Wang,Wensheng Li,Jieming Zhai,Jinxiang Liu,Haiyang Yu,Quanqi Zhang.
Fish & Shellfish Immunology(2019)
应用方向:质粒转染HEK-293T cells

2.Severe Fever With Thrombocytopenia Syndrome Virus-Induced Macrophage Differentiation Is Regulated by miR-146
Li Zhang, Yuxuan Fu1, Huanru Wang, Yajie Guan, Weiwen Zhu, Mengdi Guo, Nan Zheng and Zhiwei Wu
Frontiers in immunology(2019)
应用方向:质粒转染THP-1细胞

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